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分子杂交仪原理
- 2021-04-21-

     

分子杂交仪又称分子杂交炉和分子杂交盒,是一种通过核酸分子杂交检测基因组中是否存在已知基因序列的装置。它广泛应用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的检测和遗传疾病的基因诊断。

  根据不同实验的需要,分子杂交仪可选用不同规格型号。搅拌技术是现代实验室的理想设备,它可以代替塑料搅拌袋和水浴摇瓶,避免搅拌袋损坏带来的污染风险。混合炉具有微机精确控温、炉内空气循环装置设计独特、升温速度快等特点。

  它广泛应用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性和定量检测以及疾病的诊断。因此,它不仅在分子生物学领域,而且在临床诊断中有着广泛的应用。

  分子杂交仪由盒体、混合瓶或离心管、混合管、振动筛、隔膜、计算机控制系统等组成,如图所示,不同类型盒体所含的试管、微孔板、滑板、平板的数量也不同。

  分子杂交仪的原理如下

  根据碱基互补配对原理,在一定条件下,利用标记的已知DNA或RNA片段(探针)对样品中待测DNA序列进行检测。

  在生理条件下,DNA是一种稳定的双螺旋结构。在体外,当有变性因素(如温度超过65℃)℃, 胺或极端pH),DNA分子中的氢键断裂并解离成两个单链DNA。这种现象称为变性。去除变性因子后,单链DNA可以重组形成稳定的双链螺旋结构。这个过程称为复性或退火。

  在复性过程中,如果存在与部分样本核酸序列相同或高度同源的外源性单链DNA片段或寡核苷酸(一般为17-45碱基),则二者可以通过互补碱基形成杂交,即双链DNA分子。这个过程叫做杂交。当一个已知的DNA片段加入到重新折叠的DNA中,如果它能结合成一个双链分子,就意味着样品中含有一个已知的DNA序列。


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